电泳法分离X精子和Y精子(男科学 人类X和Y精子的分离)

原理：正常人精子膜表面含有的大量唾液酸使精子都带有负电荷，其中X和Y精子表面负电荷含量不等，这样在电场作用下可将X和Y精子分离。

试剂和器材：

1. Hank液（含10mmol/L HEPES，pH 7.4）；
2. 电泳池缓冲液：10mmol/L HEPES+30mmol/L NaCl+0.25mol/L蔗糖+1.0mg/ml白蛋白，pH 为7.4，渗透压为350mOsm/kg；
3. 电极缓冲液：100mmol/L HEPES+80mmol/L NaCl，pH为7.4，渗透压为295mOsm/kg，传导性为9700μS/cm；
4. ACE710型FreeFlow电泳仪。

方法：

1. 液化精液用Hank液2倍稀释，150g离心15min，上清液一半被弃去，用电泳池缓冲液来代替弃去的一半，混匀离心再重复1次，最后精子沉淀用电泳液混悬并调精子浓度为60～80×10⁶/ml；
2. 在标准温度22℃，电场强度80～120V/cm条件下，处理后的精子悬液以细流方式连续注入到电泳池的缓冲液中；电解液、电泳缓冲液和精子悬液垂直通过电场，精子因为带负电荷而向正极迁移，根据不同的电泳迁移率将精子分离开；
3. 分离开的精子分段进入到一组35个有出口的管中，最后收集到独立的35个容器中，分离结果直接通过电视摄像系统观察，如果在监视器上观察到密度测定曲线上出现两个明显的峰，则说明分离了X 和Y精子。

结果与讨论：Engelmann等采用该法获得了近100%的X精子和80%的Y精子；Manger等采用该法也获得满意的分离结果。精子膜表面负电荷是电泳法分离X、Y精子的基础，表面电荷的任何改变都可导致分离可能性的减少，特别在Y精子的分离方面。电泳法分离不成功，有两种可能：①精子没有表达出电荷不同；②电荷差异很小，以致不能用电泳仪鉴别。