白蛋白柱分离法分离X精子和Y精子(男科学 人类X和Y精子的分离)

原理：X精子和Y精子在白蛋白溶液中泳动速度不等，其中Y精子泳动速度更快，穿透黏稠的白蛋白溶液的能力更强，故可在较高浓度的白蛋白液层中获得更多的Y精子。

试剂与器材：

1. Tyrode液；
2. 不同浓度的白蛋白溶液（由Tyrode液稀释人血清白蛋白粉剂而获得）；
3. 14ml离心管；
4. 试管。

一、两层白蛋白柱法

1. 新鲜的液化精液与Tyrode液按1∶1比例混匀，700g离心10min，沉淀用Tyrode液调成精子浓度为60×10⁶/ml的悬液；
2. 在数支消毒无菌的8mm×75mm试管中，自下而上缓慢加入20%和10%的白蛋白溶液各0.5ml 和1.0ml，形成两层白蛋白柱，将上步制备的精子悬液分成0.5ml一份，分别加入白蛋白柱上层，使试管中可见分界清晰的三层液体；
3. 室温下孵育60min后，小心移去最上层的精子悬液层，再孵育30min，移去10%白蛋白层，剩下的20%白蛋白层700g离心15min，最后的精子沉淀用Tyrode液调精子浓度为20×10⁶/ml。

二、三层白蛋白柱法

1. 新鲜的液化精液与Tyrode液按1∶1比例混匀，300g离心10min，沉淀用Tyrode液调成精子浓度为30×10⁶/ml的悬液；
2. 将上述精子悬液分成0.5ml一份，分别加到试管中的1.0ml 7.5%白蛋白层上，室温孵育60min，7.5%白蛋白层被吸出，300g离心10min，沉淀用0.5ml Tyrode液悬浮；
3. 在另一支试管中，自下而上缓慢加入20%和12.5%白蛋白溶液各0.5ml和1.0ml，形成白蛋白柱层，将上步的0.5ml精子悬液加到白蛋白柱层上；
4. 室温下孵育1.5h后，吸出20%白蛋白层，用Tyrode液1∶1稀释后，300g离心10min，最后精子沉淀用Tyrodes液调精子浓度为20×10⁶/ml。

结果与讨论：Ericsson等采用白蛋白柱分离法获得Y精子含量高达85%，Quinlivan等采用该法Y精子含量平均达74%，而Beernink等采用该法获得的精子行人工授精，男婴出生率为79%；Wang等采用该法获得的Y精子有统计学意义上的增加，但并非如上述结果那么明显。而Brandriff等则发现白蛋白法处理后Y精子未见变化，反而是X精子有轻微增加。