精子膜完整性及运动能力的评价(男科学 精子的功能检查)

精子膜生理功能状态检查方法问题

精子膜完整性和功能活性与精子获能、顶体反应、精子运动能力及与透明带和卵黄膜结合能力紧密相关。评价精子膜完整性的传统方法是台盼蓝或伊红Y或黑色素染色法。这些染色的结果可以帮助人们了解活精子所占的百分率。其原理是活精子膜作为染料穿透的屏障，只有在精子膜受损或死精子时才可以着色。尽管这些方法对评价男性生育能力的临床意义并不大，但对于一份标本中死精子所占的百分率可提供诊断依据，对临床医生的治疗方案的选择有较大的帮助。

Jeyendran等首先建立了一种简便、经济且客观的精子膜低渗肿胀试验方法。由于正常的精子膜置入低渗（150mosmol/L）溶液中，渗透压的作用使精子尾部发生肿胀，又由于低渗肿胀试验结果与伊红Y染色结果在评价死精子方面一致，所以说，可用伊红Y染色以鉴定精子膜的结构完整性，而用低渗肿胀试验来评估精子膜生理完整性。

精子尾部低渗肿胀试验方法

低渗肿胀液法

一、试剂及设备

1. 双蒸水；
2. 果糖液（150mOsm/L）；
3. 柠檬酸钠液（150mOsm/L）；
4. 相差显微镜。

二、方法

1. 吸取0.1ml，完全液化的新鲜精液；
2. 以BWW培养液调整精子浓度为2～10×10⁶/ml；
3. 加1.0ml低渗液；
4. 混匀；
5. 滴片；
6. 37℃温育30min～1h；
7. 盖片；
8. 光学显微镜观察；
9. 计数尾部发生肿胀和未发生肿胀精子的百分率；
10. 正常参考值：精子总肿胀率为76.28%±6.87%。

水试验方法

1. 新鲜精液；
2. 37℃水浴箱中温育60min；
3. 10μl完全液化的新鲜精液加40μl双蒸水；
4. 充分混匀；
5. 滴片；
6. 37℃水浴箱中温育5～30min；
7. 相差显微镜下观察；
8. 计算200条精子中发生和未发生肿胀精子的百分率。

结果解释：大于或等于60%发生肿胀的精子为正常；59%～50%界于正常与异常之间；小于50%为异常。

低渗溶液的配制：果糖13.51g；柠檬酸钠7.35g；双蒸水1000ml。（渗透压：150mosm/kg，离子强度0.15）