梅毒的实验室检查(男科学 精液的微生物学检查)

梅毒（syphilis）是由苍白密螺旋体（又称梅毒螺旋体）引起的一种慢性传染病，主要通过性交传播。病变可累及体内任何组织、器官，成为全身性疾病。早期主要侵犯皮肤黏膜，晚期主要侵犯心血管及中枢神经系统。患梅毒的孕妇可通过胎盘将梅毒传给下一代，亦称胎传梅毒，其危害性极大。梅毒螺旋体透明不易着色，长6～15μm，宽0.15～0.25μm。长丝状，有8～15个呈锐角弯曲而规则的螺旋。具有6～20个螺旋圈。螺旋体运动特征为：蜿蜒前进、沿纵轴旋转或前后移行。弯曲移动、绕轴转动和前后伸缩运动。

梅毒螺旋体属厌氧微生物，在体外不易生存繁殖，煮沸、干燥、消毒剂可迅速致死，40～42℃时能存活2～3h。对寒冷、潮湿耐受性强。

人体感染梅毒螺旋体后，可产生细胞免疫与体液免疫应答，产生多种抗体，主要为抗牛心磷脂抗体和抗螺旋体抗体。多数抗体为组织特异性，可与其他非致病性螺旋体发生交叉反应。梅毒的实验室诊断主要是梅毒螺旋体的检查、梅毒血清学试验。

梅毒螺旋体检查

此法最适于第一期梅毒，其次为第二期梅毒。

暗视野法

用浸过生理盐水的棉花球轻轻擦去皮肤、黏膜损伤处覆盖的痂皮，用玻片沾取渗出物；局部淋巴结用针头穿入淋巴结，注入少量生理盐水，再吸取少量淋巴液，置暗视野或相差显微镜下观察。取样后要尽快检查。阳性时，可见运动活泼的微细密螺旋体，折光强，缓慢而有规律的绕自身长轴来回旋转，或前后移动。在患者新鲜渗出物中看得最清楚，一期梅毒在血清学反应未出现时即可用此法检出，但单靠本法不能确诊，因为病灶部位可能也存在非梅毒螺旋体。

免疫荧光染色法

可分为以下两种：

直接法 将被检标本涂在载玻片上，直径＜1cm，空气干燥，丙酮固定10min；加工作浓度的荧光素标记抗梅毒螺旋体血清（用经非致病性螺旋体吸收后的兔或人抗梅毒螺旋体血清标记荧光素），37℃温盒30min，清洗；用缓冲甘油封固，在荧光显微镜下观察结果。阳性时，螺旋体为亮绿色。

间接法 标本涂片制备和固定同直接法。加经吸收的抗血清，37℃反应30min，清洗；加荧光素标记的抗人或兔γ球蛋白，37℃反应30min，清洗，用缓冲甘油封固，在荧光显微镜下观察，结果同直接法。

梅毒血清学试验

一般在感染梅毒2周后才出现阳性。大致分为非梅毒螺旋体抗原试验及梅素螺旋体抗原试验两种。前者是患者体内的反应素（抗类脂质抗体）与类脂抗原反应，出现絮凝现象，灵敏度高，但缺乏特异性，一般用于筛查。后者是患者体内的特异性梅素螺旋体抗体与梅毒螺旋体反应，特异性高，常用作证实试验。

非特异性梅毒螺旋体试验

这一类实验的抗原是牛心中提取的心磷脂、胆固醇和纯化后的卵磷脂，所以也称类脂质抗原试验。梅毒螺旋体可使被破坏的组织细胞释放类脂样物质，螺旋体自身释放亦产生类脂及脂蛋白，这些物质刺激机体产生的抗体（IgG或IgM）可以与从牛心中提出的心磷脂发生抗原抗体反应，由于非梅毒螺旋体感染的各种急性或慢性组织损伤也可产生类似的抗体，所以这种反应是非特异性的，适用于筛选实验。

一、性病研究实验室试验（venereal disease research laboratory test，VDRL）

原理：试剂中的心磷脂与抗体发生反应，卵磷脂可加强心磷脂的抗原性，胆固醇可增强对抗原的敏感性，试剂中的抗原悬于无水乙醇中，在试验过程中加入水后，胆固醇析出形成载体，心磷脂和卵磷脂在水中形成胶体溶液包裹在胆固醇载体周围，形成胶体微粒，这种微粒与梅毒血清抗体反应后，通过摇动、碰撞，相互黏附形成较大的颗粒，可通过显微镜观察到。

（1）玻片定性试验操作：待检血清于56℃水浴灭活30min。吸取0.05ml血清，加在玻片圆圈中并涂匀充满；用1ml注射器装上专用针头，滴加抗原1滴（每毫升约60滴）；以800r/min速度旋转4min，判断结果。摇动玻片4min，每分钟约180次。

结果判断：

2+～4+：肉眼可观察到大的或中等大的聚合在一起的块状物。报告阳性。

1+：肉眼可观察到小块状物，液体浑浊，需要用显微镜放大到100倍观察块状物的形状。报告弱阳性。

±：显微镜观察颗粒分布不均匀，或呈现细小粗糙颗粒。报告可疑反应。

-：显微镜检查颗粒细小，分布均匀。报告阴性。

（2）玻片半定量试验 在VDRL玻片定量试验中，为排除前滞现象或假阳性，可做玻片半定量试验。操作：待测血清用生理盐水在小试管中作6个稀释度，即原血清、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32。每个稀释度血清取0.05ml，加入玻片圆圈中，按照定性试验的方法进行测定和判定结果。

二、不加热血清反应素试验（unheated serum reagin test，USR）

本实验是将脂质抗原悬于0.1mol/L EDTA，40%氯化胆碱和磷酸盐硫柳汞溶液中。EDTA可保护抗原半年内不变性，氯化胆碱可化学灭活补体，因此，血清不必加热灭活，抗原不必每天配制。

（1）玻片定性实验 操作：吸取待检血清（不必灭活）0.05ml，加于玻片上的圆圈中，并分散到整个圆圈。用1ml注射器上专用针头吸取抗原，每份待检标本滴加1滴。摇动玻片，4min后观察结果。

结果判断：

4+～3+：肉眼可观察到大的或较大的块状物。报告阳性。

2+：肉眼可观察到小块状物，液体清亮，显微镜观察较大的块状物。报告阳性。

+：在显微镜下可见小块状物，均匀分布。报告弱阳性。

±：显微镜观察颗粒分布不均匀，或呈现细小粗糙颗粒。报告可疑反应。

-：显微镜检查颗粒细小，分布均匀。报告阴性反应。

（2）玻片半定量试验 玻片试验阳性者，可做半定量试验，以进一步确诊。

操作：待测血清用生理盐水在小试管中作6个稀释度，即原血清、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32。每个稀释度取血清0.05ml，加入玻片圆圈中，按照定性试验的方法进行测定和判定结果。

三、快速血浆反应素环状卡片试验（rapid plasma reagin test，RPR）

原理和USR基本相同，因抗原吸附于炭粒上，凝集时易观察。

操作：取待测血清50μl，加入卡片上圆圈内，并分散到整个圆圈。在每份血清上加入1滴RPR抗原。旋转摇动8min，立即用肉眼观察结果。

结果判断：阴性标本不凝集。阳性标本反应液中可见到明显黑色凝集颗粒或絮片，根据颗粒和絮片的大小及有无，记录1+～4+或-。如有需要，阳性标本也可在RPR卡上将血清稀释后，做半定量试验。

四、甲苯胺红不加热血清试验（toluidine red unheated serum test，TRUST）

采用VDRL抗原混悬于含有特制的甲苯胺红溶液中，与血清中反应素反应，出现肉眼可见的凝集块。操作：将待检血清与TRUS抗原于用前放室温平衡。分别吸取阴性和阳性对照各1滴，加到反应卡的两个圈内并铺匀。吸取待检血清或血浆（不须灭活）1滴（50μl）分别均匀涂于其余圈内。轻轻摇匀抗原，用专用针头垂直滴加抗原1滴于血清圈内。摇动卡片，立即肉眼观察结果。

结果判断：阴性：呈粉红色均匀分散沉淀物。阳性：出现粉红色凝集块，根据凝集块大小记录1+～4+。阳性反应需要定量试验的，可将待检血清用生理盐水倍比稀释，然后按定性试验的方法进行。

特异性梅毒螺旋体试验

试验中使用的抗原是梅素螺旋体抗原，被测抗体针对螺旋体成分。这种抗体在感染后3～4周可检出，直到治愈后仍长期存在，因此在总人群中存在1%假阳性。特异性梅毒螺旋体试验不宜作为常规试验和筛选试验，主要用于梅毒螺旋体感染的证实，排除非梅毒螺旋体试验的假阳性，其对潜伏后期及晚期梅毒的阳性率高于非梅毒螺旋体试验，而早期的阳性率低于后者。

一、FTA-ABS试验

血清用吸附液1∶5稀释，除去非特异性反应物后，加在已固定了抗原的玻片上。待反应后，加FITC标记的抗人免疫球蛋白抗体。反应后荧光显微镜观察。20世纪90年代后又有人建立了FTA-ABS双染色试验。采用四甲基罗丹明异硫氰酸盐标记抗人IgG。复染用FITC标记的抗梅毒螺旋体抗体。复染可以保证阴性反应是血清中缺乏特异性抗体，以防抗原从玻片脱落而造成假阴性。

二、TPHA

原理 超声粉碎的梅毒螺旋体抗原致敏醛化羊红细胞，血清或脑脊液中存在抗梅毒螺旋体抗体，即可与致敏的红细胞形成肉眼可见的凝集，用未致敏的醛化红细胞作为阴性对照。

操作 取U型微孔板1块。加稀释液，第1孔1滴（25μl），第2孔4滴，第3、4孔各1滴。取1滴血清（25μl）至第1孔，混匀后取1滴至第2孔，混匀后取1滴至第3孔，混匀后弃去1滴，再从第2孔取1滴至第4孔混匀后弃去1滴，第3孔为测试孔，第4孔为对照孔。加75μl致敏红细胞至第3孔，75μl对照红细胞至第4孔。加盖静置45～60min。U型孔底观察红细胞凝集情况。凝集阳性细胞在孔底形成一层凝集，阴性细胞沉于孔底中央弱凝集形成一特异性环形。如果对照孔和测试孔均阳性，说明血清中存在抗红细胞抗体，应将待检血清与对照红细胞按1∶4稀释，室温放置45～60min，1000r/min离心5min，再用稀释液1∶5稀释后分别加入对照或致敏红细胞检测。