血清催乳素检测：放射免疫法、CLIA、ECLIA法(男科学 生殖激素的检查)

人垂体催乳素（prolactin，PRL）是由垂体前叶产生的蛋白激素。PRL在雌激素、孕激素等的基础上，对泌乳的开始及维持起着重要作用。妊娠后血清PRL水平逐渐增高，至分娩前达高峰，哺乳期维持较高水平。PRL的测定，对诊断垂体肿瘤和泌乳综合征有特别重要的价值，对男性不育如无精子症、少精子症等的诊断也有重要的意义。PRL水平的变化以增高为多数，只有少数病变如垂体前叶功能减退、单纯性PRL分泌缺乏症等，表现为PRL水平降低。目前血清催乳素检测方法有多种，本节主要介绍RIA法、CLIA法、ECLIA法。

放射免疫测定法

一、原理

采用双抗体放射免疫法

1. Ag+Ag^＊+Ab₁［Ag^＊Ab₁］+［AgAb₁］
2. ［AgAb₁］+［Ag^＊Ab₁］+Ab₂→［AgAb₁］Ab₂↓+［Ag^＊Ab₁］Ab₂↓

二、材料

1. ¹²⁵I-PRL标记物，含＜10uci的¹²⁵I标记的PRL及PBS。
2. PRL抗体（Ab₁）：兔抗人PRL抗血清及PBS。
3. PRL标准物：7瓶，浓度分别为0、5、10、20、25、50、100、200ng/ml的人PRL。
4. 质控血清：2瓶，含正常水平及高浓度PRL的人血清。
5. 沉淀抗体（Ab₂）：驴抗兔血清及PBS。

三、方法

试管编号后按下表程序进行操作。

血清催乳素放射免疫测试操作表

四、结果计算

（1）测出每份标本双管的cpm值，并计算平均数。

（2）按下式算出各标准管，质控和患者标本的B/B₀%：

（3）以各标准管B/B₀为纵轴，标准物浓度Log值（ng/ml）为横轴，在半对数坐标纸上绘制标准曲线。

（4）在标准曲线上查出质控血清及各标本的PRL浓度。

五、注意事项

1. PRL的分泌也有波动，而且易受应激状态影响。抚摸乳房或吮乳可造成PRL水平升高。各实验室应根据自己的条件做出正常值范围。对异常PRL测定的结果应综合分析，必要时可重复检测。下列正常值仅供参考：血清PRL正常浓度，男性9.8ng/ml（0～20ng/ml），女性12.3ng/ml（2～25ng/ml）。
2. 其他注意事项同促性腺激素测定。

CLIA法

一、原理

以北京倍爱康生物技术公司的催乳素（PRL）为例。本品为夹心法、化学发光免疫分析法与磁性微粒分离技术相结合的一种检测方法，并使用了两种高亲和力单克隆抗体。

将一定量的荧光素标单克隆抗体和酶标单克隆抗体加入标本、标准品和质控品中，置37℃孵育。荧光素标单克隆抗体和酶标单克隆抗体分别与PRL分子的不同表位结合，形成“三明治”结构。加入过量的结合着磁性微粒的抗荧光素抗体，它快速地与PRL——抗体复合物发生特异性结合。在外加磁场中直接沉淀，不需离心即可分离。倒去上清液，清洗沉淀的复合物，然后加入酶促化学发光底物。底物在酶的作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时便发出光子，形成发光反应，即可使用发光仪检测反应的发光强度。在检测范围内，发光强度与样本中的PRL浓度成正比，通过内插法就可以从标准曲线上读取待测样本的PRL含量。

二、试剂

1. PRL试剂：含荧光素标PRL单克隆抗体和碱性磷酸酶标PRL单克隆抗体；
2. PRL标准品：包括复溶后浓度分别为0、40、200、500、2000和5000μIU/ml，以小牛血清配制而成；
3. 分离试剂：内容物含包被着抗荧光素抗体的磁性微粒；
4. 清洗液浓缩液：内含表面活性剂、防腐剂；
5. 底物溶液：含酶促化学发光底物；
6. PRL质控品：为冻干品，含一定量的PRL。

三、操作：不同型号的仪器操作程序不同，若使用自动化的仪器，则由仪器自动操作所取代，请严格按照仪器使用说明书执行。

四、质量控制：PRL质控品测定值应在规定范围内。

五、参考范围

1. 正常男性：58.41～338.72μIU/ml
2. 正常女性：70.08～487.55μIU/ml
3. 绝经妇女：66.19～408.02μIU/ml

不同地区、不同个体、不同设备以及不同方法进行检测，所测得的PRL水平也有所不同，建议各实验室建立自己的正常值范围。

六、注意事项

1. 标本应放-20℃贮存，避免反复冻融，严重溶血、黄疸、高脂血症的标本会影响结果。
2. 不可使用EDTA或柠檬酸钠抗凝血浆标本。
3. 试剂应贮存在2～8℃冰箱内，在有效期内使用，不同批号试剂盒不能混用。
4. 待测标本及试剂上机前均应恢复至室温。
5. 若标本浓度超过5000μIU/ml，需用稀释液稀释后测定。

ECLIA法

一、原理

采用双抗体夹心法原理。待测样品、生物素化的抗泌乳素（PRL）单克隆抗体与钌（Ru）标记的抗泌乳素（PRL）另一位点单克隆抗体混匀，形成双抗夹心的抗原抗体复合物，加入链霉亲和素包被的微粒与之结合，在磁场作用下，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。

二、试剂

购买与仪器配套的试剂盒，主要包括以下几种试剂：

1. 链霉亲和素包被的微粒，粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力：470ng生物素/mg粒子，含防腐剂。
2. 生物素化的抗泌乳素单克隆抗体，10ml/1瓶，pH7.0，含防腐剂。
3. ［Ru（bpy）₃］²⁺标记的抗泌乳素单克隆抗体。
4. 质控（Q.C）血清。

三、操作：同睾酮。

四、参考范围

1. 男性：86.0～390.0mIU/L
2. 女性：72.0～511.0mIU/L

不同地区、不同个体、不同设备以及不同方法进行检测，所测得的PRL水平也有所不同，建议各实验室建立自己的正常值范围。

五、注意事项

1. 此方法不受溶血、高脂血症、黄疸及类风湿因子的影响，接受高剂量生物素（＞5mg/d）治疗的患者，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。
2. 须注意泌乳素的测定值取决于采血时间，因为泌乳素的分泌呈昼夜的周期性。泌乳素的释放生理性地受吮吸和应激的促进。另外，许多药物（如二苯安定、吩噻嗪）、TRH和雌激素可引起泌乳素升高。多巴胺、L-多巴和麦角胺衍生物抑制泌乳素的释放。
3. 泌乳素测定结果应结合患者病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。
4. 标本应放-20℃贮存，避免反复冻融。
5. 试剂应贮存在2～8℃冰箱内，在有效期内使用，不同批号试剂盒不能混用。
6. 待测标本及试剂上机前均应恢复至室温。