对于细菌或真菌的纯培养物，基因组DNA的粗提的方法主要有哪些？(微生物 病原微生物的分子诊断)

答：基因组DNA的粗提法仅适合于对基因组DNA完整性要求不高的分子生物学实验，如靶基因部分序列的分子检测与鉴定、耐药基因及耐药相关突变的检测等。粗提法提取细菌或真菌的基因组DNA，对于仪器、试验的要求较低，常用的方法主要有：

水煮法：即刮取少量菌苔于100μl ddH₂O中，100℃煮沸10分钟，13 000rpm离心2分钟，基因组DNA即溶解在上清液中。水煮法的操作非常简便，缺点是纯度不够高，且对细胞壁较厚的革兰阳性菌的提取效果较差。

Chelex提取法：与水煮法步骤基本相似，只是以Chelex提取液替代ddH₂O。Chelex提取液（100ml）的配制方法如下：5% Chelex 100 resin，100mmol/L Tris-HCl（pH 8.3）10ml，10mol/L EDTA 1ml，1% Na₃N 10ml，蛋白酶PK 50μg/ml，定容至100ml；其蛋白酶PK能裂解细菌的细胞壁成分，有助于革兰阳性菌基因组DNA的提取；Chelex 100 resin成分能吸附溶液中的蛋白成分，有利于提高DNA的纯度。

碱裂解法：碱裂解液的成分为0.5mol/L NaOH 与0.05mol/L枸橼酸钠，该方法可用于血培养液的细菌、真菌DNA的提取。挑取少量菌苔于1000μl碱裂解液或100μl血培养液于900μl碱裂解液中，静置5分钟以裂解细胞；13 000rpm离心2分钟，弃上清；加入等体积的Tis-HCl（0.5mol/L，pH 8.0）中和残余的碱液，13 000rpm离心2分钟，弃上清；加入100μl去离子水，13 000rpm离心2分钟，弃上清；重新加入100μl去离子水，13 000rpm离心2分钟，弃上清；加入100μl去离子水100℃干热10分钟；13 000rpm离心2分钟，上清液中含基因组DNA。

超声波法：用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧振荡破裂。对于大多数的细菌，可制备质量浓度为50～100mg/ml，在10～100kHz频率下处理10～15分钟，再结合水煮法以释出基因组DNA。

反复冻融法：将制备的细菌悬液在−20℃以下冷冻，室温或加热到更高的温度溶解，反复几次，以在细胞内形成冰粒，引起剩余细胞液盐浓度增高、细胞壁的溶涨，从而使细胞结构碎裂；后续步骤与水煮法同。反复冻融法可用于真菌DNA的提取。

液氮研磨法：利用液氮急速冷冻后细胞结构的固体化和脆性，在研钵内对组织或细胞进行研磨，以裂解细胞；后续步骤与水煮法同。液氮研磨法适合于器官、组织，以及真菌的基因组DNA的提取。