生物监测的菌片怎样制备？(微生物 消毒灭菌剂（设备）监测)

一、消毒试验中使用的菌片是以菌液滴加于载体上制成的。载体应根据消毒对象选择，常用的有金属、玻璃、滤纸、线、棉布等。根据其特点选择适宜材料载体作为代表。载体可以为方形，大小为10mm × 10mm。当以金属片为载体时，因方形金属载体在振敲时可将玻璃试管撞碎，故改用12mm直径圆形金属片（厚0.5mm）。

二、所用载体（除滤纸片外）于染菌前，应进行脱脂处理。脱脂方法如下：①将载体放在含洗涤剂的水中煮沸30分钟；②以自来水洗净；③用蒸馏水煮沸10分钟；④用蒸馏水漂洗至pH呈中性；⑤晾干、熨平备用。

三、布片用白平纹棉布制作。在剪开前，先将脱脂的布块按载体规定的大小，抽去边缘一周的经纬纱各一根，再按抽纱痕剪开。此法制成的载体大小一致，且无毛边。金属片以不锈钢制作，纸片以新华滤纸制作。

四、载体经压力蒸汽灭菌后，使用滴染法染菌。染菌用菌悬液：使用TSB营养肉汤配制。细菌繁殖体，可直接使用经18～24小时培养的斜面培养物，细菌芽胞可使用4℃冰箱贮存液。含菌量约为1 × 10⁸～5 × 10⁸CFU/ml，可使用浊度计调整菌液浓度。滴染法染菌时，将经灭菌的载体片平铺于无菌平皿内，逐片滴加菌液。菌液滴加量每片为10μl。用10μl移液器接灭菌塑料吸头滴染菌液，并用接种环涂匀整个载体表面。滴染菌液后，染菌载体可置37℃温箱内干燥（约20～30分钟），或置室温下自然阴干后再使用。

五、每个菌片的回收菌数，按活菌培养计数所得结果，应为5 × 10⁵～5 × 10⁶CFU/片。