阵发性睡眠性血红蛋白尿症的实验室检查(血液病学 阵发性睡眠性血红蛋白尿症)

绝大多数患者有不同程度的贫血，合并白细胞或（和）血小板减少。只有很少数血红蛋白正常。网织红细胞常增高，但往往不像其他溶血病那样明显。骨髓大都增生活跃或明显活跃，红系增生旺盛，极个别患者有某种程度的病态造血。值得提出的是，虽然PNH的骨髓增生情况较好，但做骨髓细胞培养常可发现CFU-E、CFU-GM等的集落数比正常骨髓少，说明PNH骨髓造血干/祖细胞的数量和生长能力不足，与再障有某种程度的相似。反映血管内溶血的有关实验应阳性，有血红蛋白尿者尿潜血及尿中含铁血黄素也应阳性。基于PNH红细胞对补体敏感及缺少GPI锚连蛋白，还有以下一些有诊断意义的实验室检查：

一、酸化血清溶血试验（Ham试验）：PNH病态红细胞在pH 6. 4的条件下易被替代途径激活的补体溶破，正常红细胞则否。本试验有较强的特异性，被国内外视为诊断PNH的主要依据。用光电比色法看溶血度，PNH大都在10%以上，本病患者中约79%本试验阳性。

二、糖水溶血试验（蔗糖溶血试验）：实验依据是PNH异常红细胞在等渗低离子强度的情况下易遭补体破坏。本试验敏感性高，PNH患者约88%阳性。日本学者认为是诊断本病最好的初筛试验。糖水试验的缺点是易出现假阳性反应。

三、蛇毒因子溶血试验：从眼镜蛇毒中可提出一种物质（称蛇毒因子，CoF），它本身没有溶血作用，但可在血清成分的协同下通过替代途径激活补体，在这种体系中PNH异常红细胞溶破，正常红细胞则否。本试验也有较强的特异性，敏感性比Ham试验强，比糖水试验略差。PNH患者约81%阳性。

四、补体溶血敏感试验：用抗Ⅰ抗体（冷凝集素）或抗人红细胞抗体致敏红细胞，通过经典途径激活补体，观察能使红细胞溶破所需要的补体量，判断红细胞对补体的敏感程度。据此试验可将PNH红细胞分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3型，临床溶血轻重取决于Ⅲ型细胞的多少。

五、PNH异常血细胞的检测和定量：PNH异常血细胞膜上缺乏GPI锚连蛋白，可以用有关抗体结合流式细胞仪技术检测出缺乏这些膜蛋白的异常细胞。在GPI锚连蛋白中，CD55、CD59存在于所有血细胞的膜上，且与临床表现关系密切，故常将这两种蛋白缺失作为PNH克隆的标志。以流式细胞仪检测GPI缺陷的血细胞，当CD55^-或CD59^-细胞占3%～5%时即可检出，较前述的方法敏感的多。在PNH患者的外周血中，CD59^-红细胞所占的比例较CD55^-细胞要高，CD59单抗比CD55单抗在诊断时更敏感。另外，异常中性粒细胞的数量受输血的影响也较少，对PNH患者来说，白细胞尤其是中性粒细胞GPI锚连蛋白的表达对疾病的诊断更有意义。此外，CD24、CD16或其他粒细胞表面的GPI锚连蛋白也可用来检测。

最近，Brodsky等报道了一种新的诊断方法。利用嗜水气单胞菌属的细菌产生的一种毒素（aerolysin），它能通过与GPI蛋白连接，在细胞膜上形成通道，从而溶破正常细胞将其杀死。而PNH细胞由于缺乏GPI蛋白，这种毒素无作用，PNH细胞仍保持完好。由于技术的改进，人们制成了Alexa-488标记的前aerolysin变异体（Flaer），它同野生型前aerolysin相似，可特异地结合于GPI锚连蛋白，但它不穿破细胞，因此不会导致细胞溶破。这对于共聚焦或流式细胞仪检测十分重要。该标记类似于荧光素，可在一定条件下被激发出荧光，可通过流式细胞仪进行检测。该方法具有较高的敏感性和特异性，尤其是对于中性粒细胞的检测，但不能用于红细胞的检测。现已知道，再生障碍性贫血（AA）、骨髓增生异常综合征（MDS）与PNH关系密切，在部分AA、MDS患者中可以检出PNH细胞群，但通常这些细胞群很小。Flaer则可以清楚的将很小的PNH细胞群区分出来，而有时通过CD55、CD59检测较难查出。因此，有些在CD55、CD59检测为正常但临床高度怀疑的病例，可结合Flaer检测，进一步提高诊断的敏感性和特异性。目前国外倾向于采用Flaer联合CD59来检测PNH克隆。